植物过氧化氢酶(CAT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
植物过氧化氢酶(CAT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书!本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物过氧化氢……

植物过氧化氢酶(CAT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

植物过氧化氢酶(CAT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书!本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物过氧化氢酶(CAT)水平。用纯化的植物过氧化氢酶(CAT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入……
详细介绍

植物过氧化氢酶(CAT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书!本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物过氧化氢酶(CAT)水平。用纯化的植物过氧化氢酶(CAT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入过氧化氢酶(CAT)。

检测范围:

1.5ng/L -60ng/L

使用目的:

本试剂盒用于测定植物样本中过氧化氢酶(CAT)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物过氧化氢酶(CAT)水平。用纯化的植物过氧化氢酶(CAT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入过氧化氢酶(CAT),再与HRP标记的过氧化氢酶(CAT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的过氧化氢酶(CAT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物过氧化氢酶(CAT)浓度。

试剂盒组成

试剂盒组成48孔配置96孔配置保存
说明书1份1份
封板膜2片(48)2片(96)
密封袋1个1个
酶标包被板1×481×962-8℃保存
标准品:2400ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存
标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存
酶标试剂3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
样品稀释液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
显色剂A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
显色剂B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存
植物过氧化氢酶(CAT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

样本处理及要求:

  1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
  2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
  3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
  4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
  5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
  6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
  7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤:

标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

1200ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
600ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
300ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
150ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
75ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
植物过氧化氢酶(CAT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

配液:将30倍(48T的20倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍(48T的20倍)稀释后备用

洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

温育:操作同3。

洗涤:操作同5。

显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

植物过氧化氢酶(CAT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书!本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物过氧化氢酶(CAT)水平。用纯化的植物过氧化氢酶(CAT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入过氧化氢酶(CAT)。

检测范围:

1.5ng/L -60ng/L

使用目的:

本试剂盒用于测定植物样本中过氧化氢酶(CAT)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物过氧化氢酶(CAT)水平。用纯化的植物过氧化氢酶(CAT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入过氧化氢酶(CAT),再与HRP标记的过氧化氢酶(CAT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的过氧化氢酶(CAT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物过氧化氢酶(CAT)浓度。

试剂盒组成

试剂盒组成48孔配置96孔配置保存
说明书1份1份
封板膜2片(48)2片(96)
密封袋1个1个
酶标包被板1×481×962-8℃保存
标准品:2400ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存
标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存
酶标试剂3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
样品稀释液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
显色剂A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
显色剂B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存
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样本处理及要求:

  1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
  2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
  3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
  4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
  5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
  6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
  7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤:

标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

1200ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
600ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
300ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
150ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
75ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
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加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

配液:将30倍(48T的20倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍(48T的20倍)稀释后备用

洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

温育:操作同3。

洗涤:操作同5。

显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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